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豬場血清學檢測樣品采集標準
血清學檢測,是豬場最廣泛使用的檢測方法之一.本案例中,筆者對江蘇某豬場送檢的193份血清樣進行了豬瘟抗體、豬偽狂犬gB/gE抗體、豬圓環病毒抗體、豬藍耳病毒抗體的檢測和分析.結果顯示該場后備母豬豬瘟免疫欠佳,豬偽狂犬病免疫不合格,豬藍耳病抗體水平偏高;母豬豬偽狂犬病毒感染程度較高,豬呼吸與繁殖綜合征普遍感染且抗體偏高;公豬豬圓環病毒抗體水平偏高商品豬豬瘟免疫效果不穩定豬藍耳病感染比較普遍,且部分豬群抗體水平偏高,豬圓環病毒病免疫欠佳.結合該場免疫程序,表明該場后備母豬和商品豬的豬瘟、豬偽狂犬病免疫程序需要做適當調整;同時考慮通過測序了解本場的豬藍耳病流行毒株,以確定合適的防控方案.
豬的抗體檢測是指通過檢測豬的血清或乳汁中的抗體含量,來反映機體感染或免疫保護情況的一種方法。實驗室檢測排除檢測方法自身敏感性、穩定性與人為操作因素的影響外,檢測結果是否對豬場有價值、準確還會受以下幾方面因素影響。
1.影響因素
1.1豬只個體差異
不同豬只個體對病原微生物感染或疫苗免疫后反應不同,其體內抗體滴度也有很大的差異,因此,檢測時要有足夠的樣品數量,滿足統計學的需求,盡量降低個體差異對檢測、分析造成的影響。
此外,豬只個體的差異還表現在不同胎次的母豬,對抗原反復接觸后體內抗體滴度也存在差別,母豬按胎次采樣,可用于分析豬群對疫苗免疫麻痹性的影響之外,也可以消除個體差異對檢測結果、分析產生的誤差。
1.2不同抗原的性質
抗原有兩個基本特性:抗原性和免疫原性。抗原性指抗原與其所誘導產生的抗體或致敏淋巴細胞特異性結合的能力;免疫原性是指能引起免疫應答的性能,即抗原能刺激特定的免疫細胞,使免疫細胞活化、增殖、分化,最終產生免疫效應物質抗體和致敏淋巴細胞的特性。例如:同抗原(如疫苗和野毒)有不同的免疫原性,其對免疫系統的刺激是不同的,雖然都是先感染再產生抗體(首次感染期內一般只能檢出抗原,抗體反應是滯后的),但不同抗原產生抗體的時間是不同的。
1.3母源抗體的因素
豬只體內不同病原微生物的母源抗體的消長規律,峰值期各有不同,進行采樣、檢測與結果分析時都應考慮這些因素,否則,要么分析錯誤,要么成為無價值的檢測。
1.4感染或免疫后的時間
感染或免疫后產生的抗體有其消長規律及持續時間,這就導致感染/免疫后不同階段其抗體滴度是不同的,也會顯示出很高的離散度。因此,樣品采集時,需根據不同的目的,根據免疫時間或日齡分階段采集符合統計學需求的樣本。例如在偽狂犬野毒陽性豬場檢測90日齡的仔豬gE抗體為陽性的,一定是偽狂犬野毒感染嗎?偽狂犬的母源抗體持續期特別長,一般可維持至90日齡,所以如果是偽狂犬野毒陽性豬場,90日齡之前的仔豬野毒抗體陽性比例必然是比較高的,因此單純檢測是無法判斷的。
1.5免疫次數或再次感染
豬只初次接觸抗原和再次接觸抗原,其抗體產生的速度和滴度是顯著不同的。通過抗體滴度和免疫信息分析,可反映豬場是否存在野毒的感染。這需要建立在分階段采樣的意識上,對檢測豬群進行合理的分組。
2.采樣標準原則
綜合上述影響結果的因素,豬場樣本采集需要根據檢測目的的不同,合理的進行分組,具體要求需要考慮以下幾方面。
2.1樣本有效性
樣品數量:根據統計學一般規律,采樣量20頭時可信度達98%,30頭時可信度達99%,40頭時可信度達99.5%,50頭時可信度達99.9%。
對下列豬群和豬場的采樣比例做如下劃分:
(1)公豬、后備種豬>懷孕母豬>產房母豬>保育、育肥豬。
(2)檢測重要性:祖代場>父母代場>商品場。
(3)在上述采樣標準的前提下,祖代場和父母代場的采樣比例需適當上浮10-20%。
2.2公豬與后備母豬的采樣
根據豬場實際情況,如果豬精自供,建議定期對全部公豬的血清進行檢測,每年采集2-3次,重點檢測PRV和PRRSV等抗體;如果是外購,建議選擇正規的廠家,并可要求出具檢測報告。
后備母豬一般在進隔離舍后(確定后備進場后疫苗的免疫時間),隔離1個月后 (檢測馴化或被本場毒株感染情況)及混群前2周共進行3次采樣檢測,樣本的比例為15%或至少10頭;如果涉及偽狂犬陰性場引種、偽狂犬gE抗體需逐頭檢測,至少在進隔離舍后7d全部檢測完成。如果發現有陽性,淘汰后在混群前還需全群檢測,發現有gE陽性則堅決不能混群,直至連續兩次間隔7d檢測全陰性才可混群。
2.3母豬的采樣原則
母豬群根據檢測目的的不同,母豬可按以下3種方式采樣。
A.按胎次采樣
按不同胎次進行采樣,分析可得出豬場是否存在免疫抑制性因素等現象,分析低胎次母豬的細小、乙腦等免疫保護是否合格,評估是否存在公豬精液傳播的途徑(如偽狂犬)的影響,1年需檢測3-4次。
B.按妊娠階段采樣
該方法適用于跟胎免疫或批次化管理(根據妊娠階段免疫)的豬場檢測疫苗免疫的持續期和保護期,監測母豬的免疫程序合理性;也適合監測普免豬場檢測調整仔豬的免疫時間;監測周期1年3-4次。
C.按疫苗免疫后的時間采樣
適用于普免豬場的免疫持續期檢測,分析疫苗的免疫干擾因素及免疫效果,檢測周期1年3-4次。
在對母豬進行采樣中,統計時詳細記錄樣本的胎次、妊娠階段及免疫時間,進行合理化的分組。為了達到統計學的要求,在采樣程中,適當增加樣本數量,減少因樣品因素造成誤差。
2.4仔豬的采樣原則
仔豬的采樣按照日齡和免疫時間采樣,可以用于分析母源抗體滴度(判斷首免日齡)及免疫起效期、持續期并發現豬場野毒感染的規律,推薦按照以下的兩種方式采樣。
A.疫苗免疫時間
該采樣方法可以持續跟蹤某種疫苗的抗體消長規律,分析疫苗免疫效果。
B.按日齡采樣
該采樣方法可以同時檢測不同階段的免疫效果,用于綜合分析疫苗或野毒感染狀況。
綜合上述,多種因素都會對血清學檢測結果、分析產生影響,因此我們在采集樣品時,盡量滿足以上采樣要求,使檢測結果更準確,為豬場提供更精確的服務。
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